(一)透射电镜收样要求
一、组织样本:
(1)组织固定,体积尽可能小,一般要求1立方毫米大小,如果容易漂浮的组织样本,在管口用棉花塞住保证组织浸泡于2.5%戊二醛中,组织太大固定不充分,容易造成照片模糊或者结构溶解。
(2)组织取材要迅速,在几分钟内保存于戊二醛,保持结构完整性。
(3)组织在戊二醛中4℃保存1个月以内进行实验,不要存放太长时间。
二、细胞样本:
样本在收集后一定要肉眼可见方可进行实验,一般要求细胞量10^6以上。
(1)贴壁细胞:弃去培养基,PBS洗涤3次,每孔加入1mL 2.5%戊二醛固定1-1.5h,固定完毕后,用细胞刮轻柔的将细胞刮下,收集至1.5mL离心管内,取5μL在显微镜下观察细胞是否刮碎,如果细胞完整,则1000rpm离心5min收集细胞,加入1mL新鲜的2.5%戊二醛重悬置于4℃避光保存,一般保存1周进行实验。
(2)悬浮细胞:细胞离心收集后,加1mL 2.5%戊二醛混匀固定,4℃避光保存。
三、微泡、外泌体:
需要将微泡、外泌体分离出来,2.5%戊二醛重悬固定,2.5%戊二醛的量不要太多,100uL-200uL即可,保证微泡、外泌体的浓度便于观察寻找。
(二)扫描电镜收样要求
一、组织样本:
观察面朝上固定于支持物或者观察面朝上放置于管内(管状组织需要新鲜时切面剖开内面朝外固定于支持物)。
二、细胞样本:
(1)贴壁细胞:细胞需要接在爬片上,爬片直径在1cm以内,2.5%戊二醛固定,正面朝上,切勿将有细胞一面放反。
(2)悬浮细胞:细胞离心收集后,直接固定,实验过程中制备在支持物上。
三、微泡、外泌体:
需要将微泡、外泌体分离出来,2.5%戊二醛重悬固定,离心后的需要肉眼可见的量才可检测,外泌体如果直径太小,无法观察,一般观察200 nm-1000nm左右,常规可观察微泡。
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