细胞分选技术原理,分类及其应用

细胞分选技术是一种用于从混合细胞群体中分离出特定细胞亚群的技术，它在细胞生物学、免疫学、干细胞研究和癌症细胞分析等领域有着广泛的应用。以下是细胞分选技术的原理和实验步骤的概述：

细胞分选技术原理

1. 流式细胞分选（FACS）：这是一种基于流式细胞检测技术的实时分选技术。它能够在单细胞水平上，多参数同时测量，速度快，高达上万个事件每秒，并且可以定量分析，提供统计学差异的数据。FACS根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开，实现单克隆分选。它通过测量流动的细胞/小颗粒通过检测点时与激光相互作用产生的散射光和荧光，从而得到各种特征参数。
2. 磁珠分选：利用带有磁性的珠子与细胞表面特定的标记结合，通过磁场的作用来分离特定的细胞群体。
3. 细胞沉降：基于重力的原理使体积和密度更大的组分比体积和密度较小的组分沉降速度更快，通过多次连续离心，具有越低沉降速率的组分将被分离。
4. 微流控技术：通过在微观水平上操控流体来进行单细胞分离，通常在微芯片上进行，也被称为“芯片实验室”。

实验步骤

1. 样本准备：从全血中分离PBMC或从淋巴组织中分离免疫细胞。
2. 细胞培养：在RPMI 1640完全培养基中重悬细胞，并在37°C、5% CO2的培养箱中孵育，使单核细胞贴壁。
3. 细胞标记：使用特定的荧光标记抗体对细胞进行标记，以便在流式细胞仪中识别和分选。
4. 流式细胞分选：

• 将标记后的细胞悬液放入样品管中，被高压压入流动室内，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。
• 通过超高频的压电晶体振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。
• 将这些液滴充以正、负不同的电荷，当液滴流经过带有几千伏的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中。

5.        后续处理：分选后的细胞可以直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等，可进一步进行细胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间的差异化研究。