细胞生长曲线绘制-细胞计数法

2025年3月20日 11:15:45行业资料动物和细胞服务评论23阅读模式

以下主要介绍通过细胞计数法绘制生长曲线，帮助我们更好的了解细胞的生长状态及活力，从而指导下游实验操作。

细胞计数法绘制生长曲线，是细胞培养研究中常用的技术手段。原理就是通过测定单位体积内的细胞数量，得到细胞的总浓度进而计算出细胞总数。

典型的细胞生长曲线分为四个时期：延滞期，指数期，稳定期和衰亡期。不同时期的细胞生长状态和性能各不相同。通过测定生长曲线，可以测定细胞绝对生长数，判断细胞活力，可用于测定药物等外来因素对细胞生长的影响，有助于我们选择该时期的细胞进行细胞下游实验（瞬时转染或稳定转染）。以下介绍细胞计数的主要方法和注意点：

一、实验准备：

仪器：二氧化碳培养箱，显微镜，超净工作台，血球计数板。

试剂：胰蛋白酶，培养基（血清）。

二、实验操作：

1、取生长良好的细胞，用胰蛋白酶消化，离心；

2、离心后去上清，加入新鲜适量的培养基重悬细胞，使之成为单细胞悬液；

3、按照一定的倍数稀释该单细胞悬液，稀释倍数以稀释结果细胞数在 20-200 之间为合适倍数；

4、准备血球计数板，洗净晾干；

5、吸取一定量的细胞悬液，加样到血球计数板上，显微镜下计数；

6、按照血球计数板的计数原理进行细胞计数；

7、计算细胞总数，调整细胞至一定浓度（1x10⁵/ml）。细胞浓度=细胞计数板得到的细胞数量/4x 稀释倍数 x10⁴/ml；

8、细胞再培养，准备 24 孔板，每孔中加入 0.1ml 的细胞（即 1x10⁴个细胞）和 0.9ml 的细胞培养基，轻轻晃动孔板（十字方向晃动），使细胞分布均匀，并进行常规细胞培养（48h 后换液培养）；