电镜样本取材注意事项

martin

237
文章

0
评论

2025年3月20日 11:17:07病理学服务行业资料评论21阅读模式

在生物医学超微结构观察中，透射电镜是必不可少的技术手段。样品制备作为其中关键的一环，周期长且过程复杂，取材作为样品制备的第一步，其操作成功与否直接关系到整个实验的成败。现将取材过程中应该注意的问题总结如下：

一、 动植物组织取材注意事项：

取材关键点：

1、快---样品离体后1 min内浸入固定液中，将预冷的戊二醛固定液提前准备好；

2、准---根据研究目的准确选取切取部位；

3、小---快速切取1 mm³大小的目标组织块，若组织块过大，会影响固定效果；

4、冷---尽量在低温条件下取材，降低酶的活性，减少组织自溶；取材后将样品放入4℃保存的2.5%的戊二醛固定液中；

5、损伤小---选用锋利的器械取材，防止组织受到机械损伤。

其中对于一些特殊组织，如脑、心脏等组织，先灌注固定后再取材。

快速准确的切取组织块后，固定于2.5%的戊二醛固定液中（保证在1.5 ml尖头EP管中，戊二醛至少为1 ml），4℃固定2 h或者过夜。

二、细胞取材注意事项

1、贴壁细胞：用细胞刮轻轻刮下细胞，尽量不要来回反复刮；也可将细胞消化下来（但注意减少胰酶用量及消化时间，以免损伤细胞）。然后将细胞悬液置于1.5 ml 尖头EP管中离心，一般为1000 rpm，3-5 min（具体转速及时间根据细胞种类不同稍有不同，但以不破坏细胞结构为前提）。离心之后保证细胞饼为绿豆或者米粒大小，或者在尖头EP管中高度为3-4 mm即可（细胞量至少为10⁶，但也不要过多），吸去上清，沿管壁慢慢加入1 ml 2.5%的戊二醛固定液（4℃），切记不要将细胞饼吹散。4℃保存2h或者过夜。

2、悬浮细胞、菌液：可直接按细胞悬液的操作步骤进行。

3、固体培养基培养的菌类：可直接将菌落挑取到PBS中，制成悬液之后进行以上操作。

收集好的细胞饼或者菌块，固定于2.5%的戊二醛固定液中（保证在1.5 ml尖头EP管中，戊二醛至少为1 ml），4℃固定2 h或者过夜。

三、送样注意事项：

须按规范操作获取的实验样品；将EP管用封口膜封好（防止管口漏液），用报纸或者气泡膜将EP管包裹，放入含有冰袋的泡沫盒中，要防止EP管直接接触冰袋，避免样品结冰影响观测结果。同时要将EP管固定好，防止运输过程中细胞饼散开。送样前请认真详细填写测试单，并提供参考图片或者参考文献。

四、固定液注意事项：

戊二醛母液务必选用电镜专用的，之后用0.2 M的磷酸缓冲液将母液配成2.5%，PH为7.3-7.4，4℃避光保存。