动物造模——大鼠肌炎模型SOP

martin

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2025年3月20日 11:39:44动物造模行业资料评论19阅读模式

一、目的：

建立实验室动物建模的标准操作规程。

二、适用范围：

本SOP适应于天融慧通实验室动物实验所有工作人员。

动物造模——大鼠肌炎模型SOP

三、主体内容：

1.实验动物：

取适应性饲养一周的健康Lewis大鼠，雌性，6-8周龄。

2.实验所需器械及试剂：

1）新鲜兔骨骼肌组织；

2)弗氏完全佐剂(Freund adjuvante complete, FAC)；

3）PBS(pH 7.2)缓冲液；

4）百日咳毒素；

5）去垢剂Triton X-100。

3.兔骨骼肌匀浆制备：

取新鲜兔骨骼肌组织（麻醉、消毒皮肤、取骨骼肌），冰台上剔除其神经、血管、筋膜、脂肪组织；纯骨骼肌肉称重，按20%的重量体积比加入适量经高压灭菌的 PBS(pH 7.2)缓冲液，匀浆器匀浆，4层纱布覆盖入4℃冰箱过滤。次日收集滤液用超声破碎细胞，再用匀浆器匀浆3次，过滤后按100:1的体积加入去垢剂Triton X-100，磁力搅拌器搅拌均匀，4℃离心机2500 r /min 离心10 min，显微镜检证实细胞及细胞核破碎，取上清液给予BCA法进行蛋白浓度定量(20mg/mL)，分装后置于-20℃冰箱内储存。使用时稀释为10mg/mL与弗氏完全佐剂按1:1体积比充分乳化。

4.注射诱导：

根据大鼠体重，按10mg/kg的剂量于大鼠皮下（两侧背部、两侧腹部、尾根部皮下）五点注射兔骨骼肌匀浆，免疫时间为第0d、7d、14d、21d、28d共五次免疫注射。前两周每次均同时腹腔注射百日咳毒素2ug。

5. 评价：

一般情况下，免疫2周后逐渐出现食量减少、体重减轻、毛色暗淡、杂乱，4周左右出现活动减少、肌肉萎缩、前肢屈曲、后肢无力及直立进食困难。背部皮肤出现不同程度硬结和破溃。