iTRAQ/ TMT技术服务

martin
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iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技术是一种多肽体外标记技术。该技术采用4-plex或8-plex同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，进行LC-MS/MS分析，可同时比较多种不同样本中蛋白质的相对表达含量。
TMT(Tandem Mass Tag)技术也是一种多肽体外标记的方法，采用2-plex、6-plex或10-plex同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，然后进行串联质谱分析，可同时比较2组、6组或10组不同样品中蛋白质的相对含量。
iTRAQ是由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术; TMT技术是由美国Thermo Scientific公司研发的一种多肽体外标记技术。TMT与iTRAQ试剂在结构和检测原理上基本类似，都是由报告基团、平衡基团和肽反应基团三部分组成。

 

一、服务内容
1、服务项目：iTRAQ/ TMT；
2、要求：干冰运输（详细要求见样品要求）；
3、交付：蛋白鉴定及定量结果表、肽段鉴定及定量结果表、差异蛋白结果表、生物信息学分析结果、质谱原始数据、实验报告；
4、周期：5-7周。
二、服务流程：

 

iTRAQ/TMT定量蛋白质组学实验的基本流程。
第一步，从样品中提取蛋白。
第二步，对提取后的蛋白样品进行还原烷基化处理，打开二硫键以便后续步骤充分酶解蛋白。
第三步，用Brandford法进行蛋白的浓度测定。
第四步，SDS（十二烷基磺酸钠）-PAGE。
第五步，取等量蛋白Trypsin酶解。
第六步，用iTRAQ/TMT试剂标记肽段。
第七步，将标记后的肽段进行等量混合。
第八步，对混合后的肽段使用强阳离子交换色谱（Strong Cation ExchangeChoematography，SCX）进行预分离。
第九步，通过Orbitrap Fusion Lumos分析鉴定。
三、iTRAQ/TMT定量蛋白组学分析技术优点：
高通量：8-plex iTRAQ和10-plex TMT可同时标记最多8组或10组样本；
灵敏度高：低丰度蛋白也能检出；
定量准确：不同标记的肽段等量混合后上机，避免技术误差，提高检测效率。
所采用的标本来源广泛，除培养细胞、组织外，还包括血清/血浆、唾液、脑脊液、鼻分泌物和泪液等。
四、样品要求：
1、组织样品：动物样本＞200mg，植物样品＞1g，酵母、微生物等干重200mg。
2、细胞样品：1X107个细胞。
3、蛋白样品：蛋白类样品≥500 μl, 浓度≥1 μg/μl;肽段样品≥50 μg；
蛋白提取时使用普通的组织、细胞裂解液即可。
4、co-IP样品：蛋白需求量在2-5ug左右，在寄送蛋白样品中不要包含去污剂（例如SDS）以及高的氧浓度。
5、血液样品：＞1ml(血浆注意用EDTA防凝)，血清≥0.2-0.5ml，解冻后血细胞会破裂，蛋白溶出来会影响分析，因此一般不建议送全血。如直接送提取好的蛋白，请去除高丰度，并附上去除高丰度前后的胶图。
6、其他体液：尿液≥2ml，唾液≥500ul、脑脊液≥1ml、泪液≥0.1ml、支气管灌洗液≥23ml。
注意：-80℃保存，干冰运输。

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martin
  • 本文由 发表于 2025年3月20日 11:00:38
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匿名

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