行业资料

细胞转染方法比较简介

对哺乳动物细胞转染表达蛋白来说,选择合适的转染方法和转染试剂对转染的成功率起到决定性作用。以下主要列举了瞬时转染和稳定转染的一些方法、原理及适用性,并列举脂质体细胞转染的步骤、注意事项。细胞转染,是指...

细胞的稳定转染简介

稳定转染的是将外源基因整合到细胞自身的基因组上,使外源基因成为细胞基因组的一部分而得以复制。对细胞进行稳定转染最终可筛选得到稳定细胞株,稳定细胞株在重组蛋白/抗体生产、基因编辑、功能研究等方面起着重要...

密码子、mRNA结构及基因表达优化

密码子优化是基因表达优化的关键步骤之一。其中涉及mRNA二级结构、稀有密码子、核糖体结合位点等关键因素。简单说,基因能否顺利表达蛋白与稀有密码子含量、mRNA结构是否阻碍翻译有很大关系。基因表达优化还...
行业资料

真核细胞培养常见问题分析

以下主要介绍真核细胞培养时可能遇到的问题,包括可能的原因及对应的解决方案,希望能为大家科研之路提供些许帮助。 1. 细胞培养不贴壁 可能原因: 1)胰蛋白酶消化过度; 2)支原体污染; 3)培养液中无...
载体构建

细菌突变体文库构建

一、背景介绍转座子(transposon)是一类可以自主位移并插入宿主基因组中随机位点的移动遗传因子,这种转位特性使它可以直接或间接地造成基因重排,引起基因变异。随着许多微生物基因组全序列的获得,人们...
蛋白表达

包涵体纯化蛋白复性操作简介

一、包涵体的纯化和复性概述 包涵体折叠复性的方法应具备以下几个特点:较高的活性蛋白质回收率;复性产物易于与错误折叠蛋白质分离;折叠复性后能够得到较高浓度的蛋白;折叠复性方法易于放大等。蛋白复性的过程通...
蛋白表达

包涵体蛋白常见问题解析

1.如何尽量避免蛋白表达过程中包涵体的形成?(1). 包涵体的形成很大一部分原因是蛋白表达过快引起的,那么降低诱导温度,例如25–30°C,或降低IPTG浓度(0.01–0.1mM)并延长诱导时间,或...

真菌基因编辑介绍

一、背景介绍:真菌是真核生物中一支庞大而种类繁多的物种,目前已知的约10万多种,自1996年酿酒酵母基因组被测定以来,越来越多的真菌基因组被解析和公布,测序获得大量功能未知的真菌DNA序列,鉴定这些基...

细菌同源重组改造菌株构建

一、背景介绍基因的同源重组是指外源 DNA 与受体细胞染色体DNA上的同源序列之间发生重组,并整合在预定的位置上,从而改变细菌某些遗传特性的方法。细菌中基于同源重组的基因改造技术主要有Red/ET系统...

细菌CRISPR编辑株构建

一、背景介绍细菌是自然界中数量最多的一类生物,对细菌基因组进行改造,有助于我们理解病原菌的致病机理,耐药机制,清除耐药菌;改良工业菌株发酵,合成新的次级代谢产物,丰富生物原料等。我司拥有丰富的细菌突变...