Southern 杂交

分子实验——Southern 杂交

实验介绍

Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法，Southern Blotting是将基因组总DNA酶切，通过琼脂糖凝胶电泳分离，变性之后利用虹吸原理印记到固相支持物上（如尼龙膜），然后与变性的同位素标记探针特异性地在一定温度下退火，最后根据同位素标记情况分析杂交结果的分子生物学技术。

实验应用

Southern Blotting可用于多种实验目的，比如检测目的片段拷贝数，基因突变分析，限制性片断长度多态性分析等。

实验步骤

（1）DNA大样提取：按试剂盒方式提取，需要高浓度高质量的DNA，样本质量很重要；

（2）DNA样本酶切：取DNA样本8-10ug，加酶25ul，酶切20h，随后每个样本取1-2ul进行0.8%TBE电泳胶跑胶检测，80V，3h；

（3）转膜：配置1%转膜胶，加入干净的缓冲液为1×TAE，Loading Buffer 煮过的样本加样，0V，跑胶24-26h；

（4）杂交加探针：倒入65℃预热的杂交液，封口，置于杂交室65℃摇床，120rpm，6-12h；加探针，放入摇床中杂交12h以上，65℃，120rpm。

（5）洗膜显影：将洗膜液倒入洗膜盒中，从摇床自封袋取出膜直接放入冷洗液中，清洗5min，倒掉洗膜液；加热洗膜液至70℃，再次导入到洗膜盒中，热洗60-120s后，用镊子夹起膜，放入滤纸上吸干液体，用保鲜膜包住膜放入磷屏中压好，3h之后扫磷屏；

实验案例