MLST实验

分子实验——MLST实验

实验介绍

多位点序列分析（MLST）是在多位点酶电泳的基础上提出的以核苷酸序列为基础的一种细菌分型方法，它们都是基于同一种属的细菌均含有保守性较高的“管家基因”，但对于不同的菌株，管家基因又会存在一定的变异位点。MLST则是对特定菌株确定其管家基因，通过对管家基因的测序获得该管家基因的等位基因型，这些等位基因型按照一定的顺序排序即可得到该菌株的序列型ST。

实验应用

对新获得的细菌进行基因分型，并将不同分型和对应的流行病学数据关联分析，从而对菌株进行有效的鉴别和溯源。

实验步骤

（1）确定实验菌株：或者纯合菌株；

（2）管家基因的选择和引物设计：MLST一般选择6-10个，大小为400-600的我管家基因进行检测。不同的菌株类型管家基因并不相同，需要参考文献。

（3）PCR扩增和测序：提取基因组DNA，使用PCR方法将目标片段扩增出来，进行琼脂糖凝胶电泳实验，观察若条带清晰，大小符合，即可将PCR产物进行测序；

（4）序列比对，获得等位基因型。

（5）序列型确定。

（6）数据分析：构建系统发育树，得出实验菌株和整个群体的关系。

实验例图