Southern Blot印迹杂交技术服务简介

一、实验原理：

Southern印迹杂交（Southern blot）是1975年由英国人southern创建，是研究DNA图谱的基本技术。Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。

  二、Southern杂交检测样本收集注意事项：

1.新鲜组织：

用解剖刀等迅速切成小碎块，约30-100 mg，放入2.0 mL离心管中，开盖液氮速冻15 min，-80℃保存，干冰运输。

每个southern blot泳道提供2-3管样品。

注：(1)解剖刀处理组织的时间尽量控制在1 min以内。

(2)液氮速冻时必须开盖，以防炸裂。

(3)对于较难提取的植物组织，如苎麻、榨菜、枣子、鱼、甘蔗、大薯等，1-2g样品用铝箔纸包好，液氮速冻15 min，-80℃保存，干冰运输。

2.细胞样品：

悬浮细胞1000-1500 rpm，5 min，常温离心收集细胞。贴壁细胞用胰蛋白酶消化后，吹打收集，PBS洗涤细胞，去除多余培养基和胰蛋白酶。开盖液氮速冻15 min，-80℃保存，干冰运输。

一般情况下，细胞培养的6孔板，每孔细胞数量约为0.5~2×10⁶个。每个离心管中的细胞数量控制在5×10⁶个左右！每个southern blot泳道提供2-3管样品。

3.DNA样品（双蒸水水溶解）：

2-8℃短期保存，-20℃长期保存；加冰块低温运输。

质量检测：取1-2μL的DNA进行琼脂糖凝胶电泳，无蛋白质和RNA等物质污染，无降解弥散，条带清晰。

纯度、浓度检测：OD260/280=1.8~2.0，OD260/280＞2.0；浓度≥100 ng/μL。